Multi PCR Kit

Napaka-mataas na aktibidad at mataas na pagtitiyak Taq DNA polymerase.

Ang Multi PCR Kit ay isang produktong espesyal na binuo para sa multiplex PCR. Ang Multi HotStart DNA Polymerase na nilalaman sa kit ay binago ng kemikal at ang pinakamahusay na HotStart polymerases na natagpuan sa ngayon. Ang pag-imbento ay nagbibigay-daan sa maraming pares ng mga PCR primer upang maisagawa ang mahusay na pagpapalakas sa parehong sistema ng reaksyon at ang mga reaksyon ng multiplex PCR ay maaaring maisagawa nang sensitibo.

Pusa Hindi Laki ng Pag-iimpake
4992787 5 U × 50 rxn
4992788 5 U × 50 rxn

Detalye ng Produkto

Pang-eksperimentong Mga Halimbawa

FAQ

Mga Tag ng Produkto

Mga Tampok

■ Mataas na pagtitiyak: Binago ng kemikal ang hot-start na enzyme na may oras ng pag-activate hanggang 15 min upang matiyak ang mataas na pagpapalaki ng pagiging tiyak.
■ Mataas na pagiging sensitibo: Mababang pagpapalaki ng kopya at mataas na kahusayan na pagpapalakas ng multiplex PCR.
■ Simpleng operasyon: Ang enzyme ay hindi aktibo sa mababang temperatura at temperatura ng kuwarto, at ang reagent ay maaaring ihanda sa temperatura ng kuwarto.

Kahulugan ng Gawain

Ang 1 yunit (U) HotStart Taq DNA Ang aktibidad ng Polymerase ay tinukoy bilang ang dami ng kinakailangang enzyme upang isama ang 10 nmol deoxynucleotides sa mga sangkap na hindi matutunaw ng acid sa 74 ℃ sa loob ng 30 minuto gamit ang activated salmon sperm DNA bilang template / primer.

Pangunahing Teknikal na Mga Parameter

Mayroon itong aktibidad na 5'-3 "exonuc please at walang aktibidad na 3'-5" na exonuclease na may pinakamalakas na detalye. Ang 3 end na produkto ng PCR ay A, na maaaring direktang magamit para sa TA cloning.

Pagtutukoy

Uri: Binago ng kemikal ang HotStart DNA polymerase
Mga Aplikasyon: Eksperimento sa Multiplex PCR, eksperimento sa pagtukoy ng mataas na detalye, pagpapalaki ng low-copy na gene, paglaki ng PCR ng mga template na may mga kumplikadong istraktura (tulad ng genomic DNA, cDNA, atbp.).

Ang lahat ng mga produkto ay maaaring ipasadya para sa ODM / OEM. Para sa mga detalye,mangyaring i-click ang Customized Service (ODM / OEM)


  • Nakaraan:
  • Susunod:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Experimental Example Gumamit ng genome ng tao bilang template upang palakasin ang 7 magkakaibang mga fragment (100 bp-1000 bp)
    Tandaan:
    ① Pagtukoy ng oras ng extension para sa amplification ng iba't ibang haba sa multiplex PCR: Para sa mga fragment na mas mababa sa 500 bp, pahabain nang 60 sec; Para sa mga fragment ng 500-1500 bp, pahabain nang 90 sec; Para sa mga fragment na higit sa 2000 bp, pahabain nang 120 sec.
    ② Ang hot-start ay nangangailangan ng pag-init sa 95 ° C sa loob ng 15 minuto upang matiyak ang sapat na pagpapalabas ng aktibidad ng enzyme.
    Q: Walang mga banda ng pagpapalaki

    Isang-1 na Template

    ■ Naglalaman ang template ng mga impurities ng protina o Taq inhibitors, atbp .—— Linisin ang template ng DNA, alisin ang mga impurities ng protina o i-extract ang template ng DNA na may mga kit ng paglilinis.

    ■ Ang denaturation ng template ay hindi kumpleto —— Naaangkop na taasan ang temperatura ng denaturation at pahabain ang oras ng denaturation.

    ■ Pagwasak ng template —— Muling ihanda ang template.

    A-2 Panimula

    ■ Hindi magandang kalidad ng mga primer ——Re-synthesize ang panimulang aklat.

    ■ Pangunahin na pagkasira ng katawan ——Nag-iipon ng mataas na konsentrasyon ng mga primer sa maliit na dami para sa pangangalaga. Iwasan ang maraming pagyeyelo at pagkatunaw o pangmatagalang 4 ° C cryopreserve.

    ■ Hindi wastong disenyo ng mga primer (hal. Haba ng panimulang hindi sapat, malabo na nabuo sa pagitan ng mga primer, atbp.) -Redesign primers (iwasan ang pagbuo ng primer dimer at pangalawang istraktura)

    A-3 Mg2+konsentrasyon

    ■ Mg2+ masyadong mababa ang konsentrasyon —— Maayos na taasan ang Mg2+ konsentrasyon: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon ng isang serye ng mga reaksyon mula 1 mM hanggang 3 mM na may agwat na 0.5 mM upang matukoy ang pinakamainam na Mg2+ konsentrasyon para sa bawat template at panimulang aklat.

    A-4 Temperatura ng pag-Annealing

    ■ Ang mataas na temperatura ng pagsusubo ay nakakaapekto sa pagbubuklod ng panimulang aklat at template. —— Bawasan ang temperatura ng pagsusubo at i-optimize ang kondisyon na may gradient na 2 ° C.

    A-5 Oras ng pagpapalawak

    ■ Maikling oras ng extension —— Taasan ang oras ng extension.

    T: Maling positibo

    Phenomena: Ipinapakita rin ng mga negatibong sample ang mga target na banda ng pagkakasunud-sunod.

    A-1 Contamination ng PCR

    ■ Tumawid sa kontaminasyon ng pagkakasunud-sunod ng target o mga produktong pampalaki —— Maingat na hindi pipet ang sample na naglalaman ng pagkakasunud-sunod ng target sa negatibong sample o ibubuhos ang mga ito mula sa centrifuge tube. Ang mga reagent o kagamitan ay dapat na autoclaved upang maalis ang mga umiiral na mga nucleic acid, at ang pagkakaroon ng kontaminasyon ay dapat na matukoy sa pamamagitan ng mga eksperimentong negatibong kontrol.

    ■ Reagent na kontaminasyon ——I -quote ang mga reagent at iimbak sa mababang temperatura.

    A-2 Punong Punongr

    ■ Mg2+ masyadong mababa ang konsentrasyon —— Maayos na taasan ang Mg2+ konsentrasyon: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon ng isang serye ng mga reaksyon mula 1 mM hanggang 3 mM na may agwat na 0.5 mM upang matukoy ang pinakamainam na Mg2+ konsentrasyon para sa bawat template at panimulang aklat.

    ■ Hindi wastong disenyo ng panimulang aklat, at ang pagkakasunud-sunod ng target ay may homology na may pagkakasunud-sunod na hindi target. ——Mga muling disenyo ng disenyo.

    Q: Hindi tiyak na paglaki

    Phenomena: Ang mga PCR amplification band ay hindi naaayon sa inaasahang laki, alinman sa malaki o maliit, o kung minsan ay kapwa natukoy na mga partikular na amplification band at mga hindi partikular na amplification band.

    A-1 Panimulang Gabay

    ■ Hindi magandang pagtutukoy ng primer

    ——Re-disenyo ng panimulang aklat.

    ■ Masyadong mataas ang konsentrasyon ng panimulang aklat —— Maayos na taasan ang temperatura ng denaturation at pahabain ang oras ng denaturation.

    A-2 Mg2+ konsentrasyon

    ■ Ang Mg2+ masyadong mataas ang konsentrasyon —— Maayos na bawasan ang konsentrasyon ng Mg2 +: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon ng isang serye ng mga reaksyon mula 1 mM hanggang 3 mM na may agwat na 0.5 mM upang matukoy ang pinakamainam na Mg2+ konsentrasyon para sa bawat template at panimulang aklat.

    A-3 Thermostable polymerase

    ■ Labis na halaga ng enzyme —— Bawasan nang naaangkop ang halaga ng enzyme sa agwat ng 0.5 U.

    A-4 Temperatura ng pag-Annealing

    ■ Ang temperatura ng pagsusubo ay masyadong mababa —— Naaangkop na dagdagan ang temperatura ng pagsusubo o gamitin ang dalawang yugto na pamamaraan ng pagsusubo.

    A-5 PCR cycle

    ■ Napakaraming mga cycle ng PCR —— Bawasan ang bilang ng mga cycle ng PCR.

    Q: Patchy o smear band

    A-1 Panimulang Gabay——Mahihirap na detalye --— Muling idisenyo ang panimulang aklat, baguhin ang posisyon at haba ng panimulang aklat upang mapagbuti ang pagiging tiyak nito; o magsagawa ng nakapugad na PCR.

    A-2 Template DNA

    ——Ang dalisay na template ay hindi puro ——Linisin ang template o kumuha ng DNA na may mga kit sa paglilinis.

    A-3 Mg2+ konsentrasyon

    ——Mg2+ masyadong mataas ang konsentrasyon —— Maayos na bawasan ang Mg2+ konsentrasyon: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon ng isang serye ng mga reaksyon mula 1 mM hanggang 3 mM na may agwat na 0.5 mM upang matukoy ang pinakamainam na Mg2+ konsentrasyon para sa bawat template at panimulang aklat.

    A-4 dNTP

    ——Ang konsentrasyon ng mga dNTP ay masyadong mataas —— Bawasan ang konsentrasyon ng dNTP nang naaangkop

    A-5 temperatura ng pagsusulit

    —— Masyadong mababa ang temperatura ng pagsusubo —— Naaangkop na taasan ang temperatura ng pagsusubo

    A-6 na Pag-ikot

    —— Masyadong maraming mga cycle ——Optimize ang bilang ng cycle

    Q: Gaano karaming template na DNA ang dapat idagdag sa isang 50 μl PCR system na reaksyon?
    ytry
    Q: Paano palakihin ang mahabang mga fragment?

    Ang unang hakbang ay upang piliin ang naaangkop na polymerase. Ang regular na Taq polymerase ay hindi maaaring mag-proofread dahil sa kakulangan ng aktibidad na 3'-5 'exonuc please, at ang hindi pagtutugma ay lubos na mabawasan ang kahusayan ng extension ng mga fragment. Samakatuwid, ang regular na Taq polymerase ay hindi mabisang mapalakas ang mga fragment ng target na mas malaki sa 5 kb. Ang Taq polymerase na may espesyal na pagbabago o iba pang mataas na fidelity polymerase ay dapat mapili upang mapabuti ang kahusayan ng extension at matugunan ang mga pangangailangan ng mahabang fragment amplification. Bilang karagdagan, ang pagpapalaki ng mahabang mga fragment ay nangangailangan din ng kaukulang pagsasaayos ng disenyo ng panimulang aklat, oras ng denaturation, oras ng extension, buffer pH, atbp Karaniwan, ang mga primer na may 18-24 bp ay maaaring humantong sa mas mahusay na ani. Upang maiwasan ang pinsala sa template, ang oras ng denaturation sa 94 ° C ay dapat na mabawasan sa 30 sec o mas mababa bawat cycle, at ang oras na tumaas ang temperatura sa 94 ° C bago ang amplification ay dapat mas mababa sa 1 minuto. Bukod dito, ang pagtatakda ng temperatura ng extension sa halos 68 ° C at pagdidisenyo ng oras ng extension ayon sa rate ng 1 kb / min ay maaaring matiyak na mabisang pagpapalaki ng mahabang mga fragment.

    Q: Paano mapapabuti ang katapatan ng amplification ng PCR?

    Ang rate ng error ng amplification ng PCR ay maaaring mabawasan sa pamamagitan ng paggamit ng iba't ibang mga polymerase ng DNA na may mataas na katapatan. Kabilang sa lahat ng mga Taq DNA polymerases na natagpuan sa ngayon, ang Pfu enzyme ay may pinakamababang rate ng error at pinakamataas na katapatan (tingnan ang kalakip na talahanayan). Bilang karagdagan sa pagpili ng enzyme, ang mga mananaliksik ay maaaring karagdagang bawasan ang rate ng pagbago ng PCR sa pamamagitan ng pag-optimize ng mga kondisyon ng reaksyon, kabilang ang pag-optimize ng komposisyon ng buffer, konsentrasyon ng termostable polymerase at pag-optimize ng numero ng cycle ng PCR.

    Isulat ang iyong mensahe dito at ipadala ito sa amin