2 × Taq Platinum PCR Mix

Ultra-purong HotStart mataas na katapatan na termostable na DNA polymerase.

Ang Taq Platinum DNA Polymerase ay isang binago ng kemikal na HotStart Taq polymerase na may aktibidad na 3'-5 "exonuclease at aktibidad na 5'-3" exonuc please. Ang aktibidad ng enzyme ng Taq Platinum DNA Polymerase ay naharang sa temperatura ng kuwarto. Ang aktibidad nito ay maaari lamang maiaktibo pagkatapos ng pag-init sa 94 ° C sa loob ng 5-10 minuto, sa gayon maiiwasan ang di-tukoy na pagpapalakas na dulot ng panimulang di-tiyak na pagsusubo o panimulang dumi sa mababang temperatura bago ang paunang pag-ikot ng reaksyon ng PCR, at lubos na nagpapabuti ng pagiging sensitibo at pagiging tiyak ng reaksyon ng PCR. Bilang karagdagan, ang Taq Platinum DNA Polymerase ay may napakataas na katapatan, na siyang pangalawa sa Pfu polymerase. Ang bilis ng extension ng polimerisasyon ng DNA ay mas mabilis kaysa sa Pfu polymerase at mas mataas ang kahusayan ng amplification.

Pusa Hindi Laki ng Pag-iimpake
4992789 5x1ml
4992790 5 × 1 ML

Detalye ng Produkto

Pang-eksperimentong Halimbawa

FAQ

Mga Tag ng Produkto

Kahulugan ng Gawain

Ang 1 yunit (U) Taq Platinum DNA Ang aktibidad ng Polymerase ay tinukoy bilang ang dami ng kinakailangang enzyme upang isama ang 10 nmol deoxynucleotides sa mga sangkap na hindi matutunaw ng acid sa 74 ° C sa loob ng 30 minuto gamit ang activated salmon sperm DNA bilang template / primer.

Pagkontrol sa Kalidad

Ang kadalisayan sa pamamagitan ng pagtuklas ng SDS-PAGE ay higit sa 99%; Walang nakitang aktibidad ng exogenous nuclease; Ang solong-kopya na gene sa genome ng tao ay maaaring mapalakas nang epektibo; Walang makabuluhang pagbabago ng aktibidad kapag nakaimbak sa temperatura ng kuwarto sa loob ng isang linggo.

Pangunahing Teknikal na Mga Parameter

Mayroon itong aktibidad na 5'-3 "exonuc please at 3'-5" exonuc please na aktibidad, at ang katapatan nito ay katabi ng Pfu polymerase. Ang bilis ng extension ng Taq Platinum Polymerase ay mas mabilis kaysa sa Pfu polymerase at ang kahusayan ng amplification ay mas mataas. Ang mga produkto ng PCR ay maaaring direktang ligated sa mapurol na dulo o i-clone ng TA vector. Kung kailangang mapabuti ang kahusayan sa pag-clone, inirerekumenda na linisin muna at magdagdag ng 3'-dA overhangs bago ang pag-clone sa TA vector.

Isang-tubong Taq Platinum MasterMix (National High-Tech Product Certification)

■ Ang Taq Platinum MasterMix ay napabuti ang pagiging tiyak at pagiging sensitibo ng reaksyon ng PCR at maaaring palakasin ang mga kumplikadong template na may mataas na nilalaman ng GC, pangalawang istraktura at mga katulad nito. Mas mababa sa 2 kopya ng target na template ang maaaring mapalakas, tinitiyak ang mas tumpak na mga pang-eksperimentong resulta.

■ Ang natatanging formula ng Taq Platinum MasterMix ay ginagawang matatag ang buong sistema ng reaksyon, at ang aktibidad ay hindi maaapektuhan ng paulit-ulit na freeze-lasaw o pangmatagalang imbakan sa 4 ° C.

■ Ang matatag at mahusay na paunang handa na PCR na may halong solusyon ay maaaring gawing mabilis at simple ang operasyon, lubos na binabawasan ang lakas ng paggawa at error sa pag-sample. Ang enhancer at optimizer ng PCR na may mahusay na pagganap ay kasama rin sa halo, na binabawasan ang mga kinakailangan sa mga kundisyon ng PCR.

■ Ang produktong ito ay may parehong system na naglalaman ng pangulay at walang pangulay. Ang mga produktong naglalaman ng pangulay na MasterMix ay maaaring direktang electrophoresed pagkatapos ng PCR, nang hindi nagdaragdag ng loading buffer.

Mga Aplikasyon

Maaari nitong palitan ang Pfu polymerase upang palakasin ang mataas na mga produkto ng fidelity mula sa mga kumplikadong template tulad ng mga genome, at angkop ito para sa mga application tulad ng pag-clone ng mga expression gen, tukoy na tukoy sa site at pagsusuri ng solong nucleotide polymorphism (SNP), atbp.

Pag-iingat sa Pagdidisenyo ng Mga PCR Primer:

Ang haba ng panimulang aklat ay karaniwang 20-25 mer. Gayunpaman, kapag gumaganap ng mahabang fragment PCR, ang panimulang haba ay dapat na tumaas sa 30-35 mer.

■ Walang komplementaryong pagpapares sa pagitan ng dalawang primer, lalo na para sa huling 3 na base sa 3 ′ na pagtatapos.

■ Ang nilalaman ng GC ay dapat na 50-60%, at iwasan ang lokal na mayaman na GC o AT. Upang gawing matatag ang panimulang aklat at template, iwasan ang mayamang istraktura sa dulo ng 3 ′.

■ Iwasan ang panimulang aklat upang makabuo ng pangalawang istraktura.

■ Pumili ng dalawang primer na may temperatura ng Tm na malapit sa bawat isa.

Pagkalkula ng Halaga ng Tm ng Mga Primer para sa PCR:

■ Kapag ang panimulang aklat ay mas mababa sa 20 mer: Tm = 2 ° C × (A + T) + 4 ° C × (G + C).

■ Kapag ang panimulang aklat ay higit sa 20 mer: Tm = 81.5 + 0.41 × (GC%) - 600 / L, kung saan ang L ay ang haba ng panimulang aklat.

■ Itakda ang temperatura ng pagsusubo sa (Tm-5) ° C.

Input ng PCR Primer

Ang naaangkop na pangwakas na konsentrasyon ng mga primer ay maaaring mapili sa pagitan ng 0.1 μM at 1.0 μM. Masyadong mababa ang isang primer na konsentrasyon ay humahantong sa mababang ani ng mga produktong amplification, habang ang masyadong mataas na konsentrasyon ng panimulang aklat ay mas madaling kapitan ng di-tukoy na amplification. Karaniwan, kapag ang dami ng template na DNA ay malaki o kumplikadong template na DNA (tulad ng DNA ng genome ng tao) ay ginagamit bilang isang template, ang pangunahing konsentrasyon ay dapat na mas mababa. Kapag ang dami ng template na DNA ay maliit o simpleng template na DNA (halimbawa, ang plasmid DNA, atbp.) Ay ginamit bilang isang template, ang pangunahing konsentrasyon ay dapat na mas mataas.

Ang lahat ng mga produkto ay maaaring ipasadya para sa ODM / OEM. Para sa mga detalye,mangyaring i-click ang Customized Service (ODM / OEM)


  • Nakaraan:
  • Susunod:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental ExampleExperimental Example Gumamit ng genomic DNA bilang template upang palakasin ang fragment ng 1 kb. Matapos ang reaksyon ng PCR, kumuha ng 5 μl para sa pagtuklas ng electrophoresis.
    Q: Walang mga banda ng pagpapalaki

    Isang-1 na Template

    ■ Naglalaman ang template ng mga impurities ng protina o Taq inhibitors, atbp .—— Linisin ang template ng DNA, alisin ang mga impurities ng protina o i-extract ang template ng DNA na may mga kit ng paglilinis.

    ■ Ang denaturation ng template ay hindi kumpleto —— Naaangkop na taasan ang temperatura ng denaturation at pahabain ang oras ng denaturation.

    ■ Pagwasak ng template —— Muling ihanda ang template.

    A-2 Panimula

    ■ Hindi magandang kalidad ng mga primer ——Re-synthesize ang panimulang aklat.

    ■ Pangunahin na pagkasira ng katawan ——Nag-iipon ng mataas na konsentrasyon ng mga primer sa maliit na dami para sa pangangalaga. Iwasan ang maraming pagyeyelo at pagkatunaw o pangmatagalang 4 ° C cryopreserve.

    ■ Hindi wastong disenyo ng mga primer (hal. Haba ng panimulang hindi sapat, malabo na nabuo sa pagitan ng mga primer, atbp.) -Redesign primers (iwasan ang pagbuo ng primer dimer at pangalawang istraktura)

    A-3 Mg2+konsentrasyon

    ■ Mg2+ masyadong mababa ang konsentrasyon —— Maayos na taasan ang Mg2+ konsentrasyon: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon ng isang serye ng mga reaksyon mula 1 mM hanggang 3 mM na may agwat na 0.5 mM upang matukoy ang pinakamainam na Mg2+ konsentrasyon para sa bawat template at panimulang aklat.

    A-4 Temperatura ng pag-Annealing

    ■ Ang mataas na temperatura ng pagsusubo ay nakakaapekto sa pagbubuklod ng panimulang aklat at template. —— Bawasan ang temperatura ng pagsusubo at i-optimize ang kondisyon na may gradient na 2 ° C.

    A-5 Oras ng pagpapalawak

    ■ Maikling oras ng extension —— Taasan ang oras ng extension.

    T: Maling positibo

    Phenomena: Ipinapakita rin ng mga negatibong sample ang mga target na banda ng pagkakasunud-sunod.

    A-1 Contamination ng PCR

    ■ Tumawid sa kontaminasyon ng pagkakasunud-sunod ng target o mga produktong pampalaki —— Maingat na hindi pipet ang sample na naglalaman ng pagkakasunud-sunod ng target sa negatibong sample o ibubuhos ang mga ito mula sa centrifuge tube. Ang mga reagent o kagamitan ay dapat na autoclaved upang maalis ang mga umiiral na mga nucleic acid, at ang pagkakaroon ng kontaminasyon ay dapat na matukoy sa pamamagitan ng mga eksperimentong negatibong kontrol.

    ■ Reagent na kontaminasyon ——I -quote ang mga reagent at iimbak sa mababang temperatura.

    A-2 Punong Punongr

    ■ Mg2+ masyadong mababa ang konsentrasyon —— Maayos na taasan ang Mg2+ konsentrasyon: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon ng isang serye ng mga reaksyon mula 1 mM hanggang 3 mM na may agwat na 0.5 mM upang matukoy ang pinakamainam na Mg2+ konsentrasyon para sa bawat template at panimulang aklat.

    ■ Hindi wastong disenyo ng panimulang aklat, at ang pagkakasunud-sunod ng target ay may homology na may pagkakasunud-sunod na hindi target. ——Mga muling disenyo ng disenyo.

    Q: Hindi tiyak na paglaki

    Phenomena: Ang mga PCR amplification band ay hindi naaayon sa inaasahang laki, alinman sa malaki o maliit, o kung minsan ay kapwa natukoy na mga partikular na amplification band at mga hindi partikular na amplification band.

    A-1 Panimulang Gabay

    ■ Hindi magandang pagtutukoy ng primer

    ——Re-disenyo ng panimulang aklat.

    ■ Masyadong mataas ang konsentrasyon ng panimulang aklat —— Maayos na taasan ang temperatura ng denaturation at pahabain ang oras ng denaturation.

    A-2 Mg2+ konsentrasyon

    ■ Ang Mg2+ masyadong mataas ang konsentrasyon —— Maayos na bawasan ang konsentrasyon ng Mg2 +: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon ng isang serye ng mga reaksyon mula 1 mM hanggang 3 mM na may agwat na 0.5 mM upang matukoy ang pinakamainam na Mg2+ konsentrasyon para sa bawat template at panimulang aklat.

    A-3 Thermostable polymerase

    ■ Labis na halaga ng enzyme —— Bawasan nang naaangkop ang halaga ng enzyme sa agwat ng 0.5 U.

    A-4 Temperatura ng pag-Annealing

    ■ Ang temperatura ng pagsusubo ay masyadong mababa —— Naaangkop na dagdagan ang temperatura ng pagsusubo o gamitin ang dalawang yugto na pamamaraan ng pagsusubo.

    A-5 PCR cycle

    ■ Napakaraming mga cycle ng PCR —— Bawasan ang bilang ng mga cycle ng PCR.

    Q: Patchy o smear band

    A-1 Panimulang Gabay——Mahihirap na detalye --— Muling idisenyo ang panimulang aklat, baguhin ang posisyon at haba ng panimulang aklat upang mapagbuti ang pagiging tiyak nito; o magsagawa ng nakapugad na PCR.

    A-2 Template DNA

    ——Ang dalisay na template ay hindi puro ——Linisin ang template o kumuha ng DNA na may mga kit sa paglilinis.

    A-3 Mg2+ konsentrasyon

    ——Mg2+ masyadong mataas ang konsentrasyon —— Maayos na bawasan ang Mg2+ konsentrasyon: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon ng isang serye ng mga reaksyon mula 1 mM hanggang 3 mM na may agwat na 0.5 mM upang matukoy ang pinakamainam na Mg2+ konsentrasyon para sa bawat template at panimulang aklat.

    A-4 dNTP

    ——Ang konsentrasyon ng mga dNTP ay masyadong mataas —— Bawasan ang konsentrasyon ng dNTP nang naaangkop

    A-5 temperatura ng pagsusulit

    —— Masyadong mababa ang temperatura ng pagsusubo —— Naaangkop na taasan ang temperatura ng pagsusubo

    A-6 na Pag-ikot

    —— Masyadong maraming mga cycle ——Optimize ang bilang ng cycle

    Q: Gaano karaming template na DNA ang dapat idagdag sa isang 50 μl PCR system na reaksyon?
    ytry
    Q: Paano palakihin ang mahabang mga fragment?

    Ang unang hakbang ay upang piliin ang naaangkop na polymerase. Ang regular na Taq polymerase ay hindi maaaring mag-proofread dahil sa kakulangan ng aktibidad na 3'-5 'exonuc please, at ang hindi pagtutugma ay lubos na mabawasan ang kahusayan ng extension ng mga fragment. Samakatuwid, ang regular na Taq polymerase ay hindi mabisang mapalakas ang mga fragment ng target na mas malaki sa 5 kb. Ang Taq polymerase na may espesyal na pagbabago o iba pang mataas na fidelity polymerase ay dapat mapili upang mapabuti ang kahusayan ng extension at matugunan ang mga pangangailangan ng mahabang fragment amplification. Bilang karagdagan, ang pagpapalaki ng mahabang mga fragment ay nangangailangan din ng kaukulang pagsasaayos ng disenyo ng panimulang aklat, oras ng denaturation, oras ng extension, buffer pH, atbp Karaniwan, ang mga primer na may 18-24 bp ay maaaring humantong sa mas mahusay na ani. Upang maiwasan ang pinsala sa template, ang oras ng denaturation sa 94 ° C ay dapat na mabawasan sa 30 sec o mas mababa bawat cycle, at ang oras na tumaas ang temperatura sa 94 ° C bago ang amplification ay dapat mas mababa sa 1 minuto. Bukod dito, ang pagtatakda ng temperatura ng extension sa halos 68 ° C at pagdidisenyo ng oras ng extension ayon sa rate ng 1 kb / min ay maaaring matiyak na mabisang pagpapalaki ng mahabang mga fragment.

    Q: Paano mapapabuti ang katapatan ng amplification ng PCR?

    Ang rate ng error ng amplification ng PCR ay maaaring mabawasan sa pamamagitan ng paggamit ng iba't ibang mga polymerase ng DNA na may mataas na katapatan. Kabilang sa lahat ng mga Taq DNA polymerases na natagpuan sa ngayon, ang Pfu enzyme ay may pinakamababang rate ng error at pinakamataas na katapatan (tingnan ang kalakip na talahanayan). Bilang karagdagan sa pagpili ng enzyme, ang mga mananaliksik ay maaaring karagdagang bawasan ang rate ng pagbago ng PCR sa pamamagitan ng pag-optimize ng mga kondisyon ng reaksyon, kabilang ang pag-optimize ng komposisyon ng buffer, konsentrasyon ng termostable polymerase at pag-optimize ng numero ng cycle ng PCR.

    Isulat ang iyong mensahe dito at ipadala ito sa amin