2 × Pfu PCR Mix

Ultra-purong mataas na katapatan Taq DNA polymerase.

Ang Pfu DNA Polymerase ay ipinahayag mula sa E.coli na may na-clone na Pyrococus Furiosis DNA Polymerase gene at pinadalisay at pinaghihiwalay ng maraming paglilinis ng haligi. Dahil ang Pfu ay mayroong 3'-5 "exonuc please na aktibidad, maaari itong i-proofread sa proseso ng paglaki ng DNA, habang ang tradisyunal na Taq DNA Polymerase ay hindi. Bagaman ang iba pang mga Taq DNA polymerase tulad ng Vent, Deep Vent, Tli, UITma, atbp. Ay may mga function sa pag-proofread, ang Pfu ang may pinakamababang rate ng hindi pagtutugma sa lahat ng mga Taq DNA polymerase na natagpuan sa ngayon. Ang Pfu DNA Polymerase ay may mas mahusay na katatagan ng thermal kaysa sa karaniwang Taq DNA polymerase, at mapapanatili nito ang higit sa 90% na aktibidad sa 95 ° C sa loob ng 1 oras.

Isang tubong Pfu PCR Mix (National High-Tech Product Certification)

■ Ang Pfu PCR Mix ay napabuti ang pagiging tiyak at pagiging sensitibo ng reaksyon ng PCR at maaaring palakasin ang mga kumplikadong template na may mataas na nilalaman ng GC, pangalawang istraktura at mga katulad nito. Mas mababa sa 2 kopya ng target na template ang maaaring mapalakas, tinitiyak ang mas tumpak na mga pang-eksperimentong resulta.

■ Ang natatanging pfu MasterMix na formula ay ginagawang matatag ang buong sistema ng reaksyon, at ang aktibidad ay hindi maaapektuhan ng paulit-ulit na freeze-lasaw o pangmatagalang imbakan sa 4 ° C.

■ Ang matatag at mahusay na paunang handa na solusyon sa PCR mix ay maaaring gawing mabilis at simple ang operasyon, lubos na binabawasan ang lakas ng paggawa at error sa pag-sample. Ang enhancer at optimizer ng PCR na may mahusay na pagganap ay kasama rin sa halo, na binabawasan ang mga kinakailangan sa mga kundisyon ng PCR.

■ Ang produktong ito ay may parehong system na naglalaman ng pangulay at walang pangulay. Ang mga produktong naglalaman ng tina ng PCR Mix ay maaaring direktang electrophoresed pagkatapos ng PCR, nang hindi nagdaragdag ng sample na buffer.

Pusa Hindi Laki ng Pag-iimpake
4992780 1ml
4992781 5 * 1ml
4992782 1ml
4992906 5 * 1ml

Detalye ng Produkto

Workflow

FAQ

Mga Tag ng Produkto

Kahulugan ng Gawain

Ang aktibidad ng 1 yunit (U) Pfu DNA Polymerase ay tinukoy bilang ang dami ng kinakailangang enzyme upang isama ang 10 nmol deoxynucleotides sa mga sangkap na hindi matutunaw ng acid sa 74 ° C sa loob ng 30 minuto gamit ang activated salmon sperm DNA bilang isang template / primer.

Pagkontrol sa Kalidad

Ang kadalisayan sa pamamagitan ng pagtuklas ng SDS-PAGE ay higit sa 99%; Walang nakitang aktibidad ng exogenous nuclease; Ang solong-kopya na gene sa genome ng tao ay maaaring mapalakas nang epektibo; Walang makabuluhang pagbabago ng aktibidad kapag nakaimbak sa temperatura ng kuwarto sa loob ng isang linggo.

Pangunahing Teknikal na Mga Parameter

Mayroon itong aktibidad na 3'-5 "exonuc please at walang aktibidad na 5'-3" exonuc please. Ang bilis ng extension ng DNA amplification ay mas mababa kaysa sa Taq polymerase, at sa pangkalahatan ang bilis ng extension ng Pfu enzyme ay 0.5-1 kb bawat minuto. Ang katatagan ng thermal ng Pfu ay mas mahusay kaysa sa Taq. Para sa mga template na may mataas na nilalaman ng GC, ang temperatura ng denaturation ay maaaring tumaas sa 98 ° C, na walang epekto sa aktibidad ng Pfu polymerase. Ang produkto ng PCR ay blunt-end, na maaaring idagdag sa 3'-dA overhangs bago ligated sa TA vector o i-clone sa blunt-end vector

Mga Aplikasyon

Maaari itong magamit para sa mataas na fidelity amplification ng DNA, tulad ng clone ng expression ng gene, pag-mutate na nakadirekta sa site, pagtatasa ng solong nucleotide polymorphism (SNP) at pagtatapos ng pag-aayos.

Ang lahat ng mga produkto ay maaaring ipasadya para sa ODM / OEM. Para sa mga detalye,mangyaring i-click ang Customized Service (ODM / OEM)


  • Nakaraan:
  • Susunod:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental ExampleExperimental Example Gumamit ng genomic DNA bilang template upang palakasin ang fragment ng 1kb.
    Pagkatapos ng reaksyon ng PCR, kumuha ng 5 μl para sa pagtuklas ng electrophoresis.
    Q: Walang mga banda ng pagpapalaki

    Isang-1 na Template

    ■ Naglalaman ang template ng mga impurities ng protina o Taq inhibitors, atbp .—— Linisin ang template ng DNA, alisin ang mga impurities ng protina o i-extract ang template ng DNA na may mga kit ng paglilinis.

    ■ Ang denaturation ng template ay hindi kumpleto —— Naaangkop na taasan ang temperatura ng denaturation at pahabain ang oras ng denaturation.

    ■ Pagwasak ng template —— Muling ihanda ang template.

    A-2 Panimula

    ■ Hindi magandang kalidad ng mga primer ——Re-synthesize ang panimulang aklat.

    ■ Pangunahin na pagkasira ng katawan ——Nag-iipon ng mataas na konsentrasyon ng mga primer sa maliit na dami para sa pangangalaga. Iwasan ang maraming pagyeyelo at pagkatunaw o pangmatagalang 4 ° C cryopreserve.

    ■ Hindi wastong disenyo ng mga primer (hal. Haba ng panimulang hindi sapat, malabo na nabuo sa pagitan ng mga primer, atbp.) -Redesign primers (iwasan ang pagbuo ng primer dimer at pangalawang istraktura)

    A-3 Mg2+konsentrasyon

    ■ Mg2+ masyadong mababa ang konsentrasyon —— Maayos na taasan ang Mg2+ konsentrasyon: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon ng isang serye ng mga reaksyon mula 1 mM hanggang 3 mM na may agwat na 0.5 mM upang matukoy ang pinakamainam na Mg2+ konsentrasyon para sa bawat template at panimulang aklat.

    A-4 Temperatura ng pag-Annealing

    ■ Ang mataas na temperatura ng pagsusubo ay nakakaapekto sa pagbubuklod ng panimulang aklat at template. —— Bawasan ang temperatura ng pagsusubo at i-optimize ang kondisyon na may gradient na 2 ° C.

    A-5 Oras ng pagpapalawak

    ■ Maikling oras ng extension —— Taasan ang oras ng extension.

    T: Maling positibo

    Phenomena: Ipinapakita rin ng mga negatibong sample ang mga target na banda ng pagkakasunud-sunod.

    A-1 Contamination ng PCR

    ■ Tumawid sa kontaminasyon ng pagkakasunud-sunod ng target o mga produktong pampalaki —— Maingat na hindi pipet ang sample na naglalaman ng pagkakasunud-sunod ng target sa negatibong sample o ibubuhos ang mga ito mula sa centrifuge tube. Ang mga reagent o kagamitan ay dapat na autoclaved upang maalis ang mga umiiral na mga nucleic acid, at ang pagkakaroon ng kontaminasyon ay dapat na matukoy sa pamamagitan ng mga eksperimentong negatibong kontrol.

    ■ Reagent na kontaminasyon ——I -quote ang mga reagent at iimbak sa mababang temperatura.

    A-2 Punong Punongr

    ■ Mg2+ masyadong mababa ang konsentrasyon —— Maayos na taasan ang Mg2+ konsentrasyon: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon ng isang serye ng mga reaksyon mula 1 mM hanggang 3 mM na may agwat na 0.5 mM upang matukoy ang pinakamainam na Mg2+ konsentrasyon para sa bawat template at panimulang aklat.

    ■ Hindi wastong disenyo ng panimulang aklat, at ang pagkakasunud-sunod ng target ay may homology na may pagkakasunud-sunod na hindi target. ——Mga muling disenyo ng disenyo.

    Q: Hindi tiyak na paglaki

    Phenomena: Ang mga PCR amplification band ay hindi naaayon sa inaasahang laki, alinman sa malaki o maliit, o kung minsan ay kapwa natukoy na mga partikular na amplification band at mga hindi partikular na amplification band.

    A-1 Panimulang Gabay

    ■ Hindi magandang pagtutukoy ng primer

    ——Re-disenyo ng panimulang aklat.

    ■ Masyadong mataas ang konsentrasyon ng panimulang aklat —— Maayos na taasan ang temperatura ng denaturation at pahabain ang oras ng denaturation.

    A-2 Mg2+ konsentrasyon

    ■ Ang Mg2+ masyadong mataas ang konsentrasyon —— Maayos na bawasan ang konsentrasyon ng Mg2 +: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon ng isang serye ng mga reaksyon mula 1 mM hanggang 3 mM na may agwat na 0.5 mM upang matukoy ang pinakamainam na Mg2+ konsentrasyon para sa bawat template at panimulang aklat.

    A-3 Thermostable polymerase

    ■ Labis na halaga ng enzyme —— Bawasan nang naaangkop ang halaga ng enzyme sa agwat ng 0.5 U.

    A-4 Temperatura ng pag-Annealing

    ■ Ang temperatura ng pagsusubo ay masyadong mababa —— Naaangkop na dagdagan ang temperatura ng pagsusubo o gamitin ang dalawang yugto na pamamaraan ng pagsusubo.

    A-5 PCR cycle

    ■ Napakaraming mga cycle ng PCR —— Bawasan ang bilang ng mga cycle ng PCR.

    Q: Patchy o smear band

    A-1 Panimulang Gabay——Mahihirap na detalye --— Muling idisenyo ang panimulang aklat, baguhin ang posisyon at haba ng panimulang aklat upang mapagbuti ang pagiging tiyak nito; o magsagawa ng nakapugad na PCR.

    A-2 Template DNA

    ——Ang dalisay na template ay hindi puro ——Linisin ang template o kumuha ng DNA na may mga kit sa paglilinis.

    A-3 Mg2+ konsentrasyon

    ——Mg2+ masyadong mataas ang konsentrasyon —— Maayos na bawasan ang Mg2+ konsentrasyon: I-optimize ang Mg2+ konsentrasyon ng isang serye ng mga reaksyon mula 1 mM hanggang 3 mM na may agwat na 0.5 mM upang matukoy ang pinakamainam na Mg2+ konsentrasyon para sa bawat template at panimulang aklat.

    A-4 dNTP

    ——Ang konsentrasyon ng mga dNTP ay masyadong mataas —— Bawasan ang konsentrasyon ng dNTP nang naaangkop

    A-5 temperatura ng pagsusulit

    —— Masyadong mababa ang temperatura ng pagsusubo —— Naaangkop na taasan ang temperatura ng pagsusubo

    A-6 na Pag-ikot

    —— Masyadong maraming mga cycle ——Optimize ang bilang ng cycle

    Q: Gaano karaming template na DNA ang dapat idagdag sa isang 50 μl PCR system na reaksyon?
    ytry
    Q: Paano palakihin ang mahabang mga fragment?

    Ang unang hakbang ay upang piliin ang naaangkop na polymerase. Ang regular na Taq polymerase ay hindi maaaring mag-proofread dahil sa kakulangan ng aktibidad na 3'-5 'exonuc please, at ang hindi pagtutugma ay lubos na mabawasan ang kahusayan ng extension ng mga fragment. Samakatuwid, ang regular na Taq polymerase ay hindi mabisang mapalakas ang mga fragment ng target na mas malaki sa 5 kb. Ang Taq polymerase na may espesyal na pagbabago o iba pang mataas na fidelity polymerase ay dapat mapili upang mapabuti ang kahusayan ng extension at matugunan ang mga pangangailangan ng mahabang fragment amplification. Bilang karagdagan, ang pagpapalaki ng mahabang mga fragment ay nangangailangan din ng kaukulang pagsasaayos ng disenyo ng panimulang aklat, oras ng denaturation, oras ng extension, buffer pH, atbp Karaniwan, ang mga primer na may 18-24 bp ay maaaring humantong sa mas mahusay na ani. Upang maiwasan ang pinsala sa template, ang oras ng denaturation sa 94 ° C ay dapat na mabawasan sa 30 sec o mas mababa bawat cycle, at ang oras na tumaas ang temperatura sa 94 ° C bago ang amplification ay dapat mas mababa sa 1 minuto. Bukod dito, ang pagtatakda ng temperatura ng extension sa halos 68 ° C at pagdidisenyo ng oras ng extension ayon sa rate ng 1 kb / min ay maaaring matiyak na mabisang pagpapalaki ng mahabang mga fragment.

    Q: Paano mapapabuti ang katapatan ng amplification ng PCR?

    Ang rate ng error ng amplification ng PCR ay maaaring mabawasan sa pamamagitan ng paggamit ng iba't ibang mga polymerase ng DNA na may mataas na katapatan. Kabilang sa lahat ng mga Taq DNA polymerases na natagpuan sa ngayon, ang Pfu enzyme ay may pinakamababang rate ng error at pinakamataas na katapatan (tingnan ang kalakip na talahanayan). Bilang karagdagan sa pagpili ng enzyme, ang mga mananaliksik ay maaaring karagdagang bawasan ang rate ng pagbago ng PCR sa pamamagitan ng pag-optimize ng mga kondisyon ng reaksyon, kabilang ang pag-optimize ng komposisyon ng buffer, konsentrasyon ng termostable polymerase at pag-optimize ng numero ng cycle ng PCR.

    Isulat ang iyong mensahe dito at ipadala ito sa amin